液相色譜柱在使用前，要先進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
建議使用流動相溶解樣品；
使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；
使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：
流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)；
流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)；
流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)；
流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，建議使用對紫外吸收較低的溶劑配制；
流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求佳柱效，建議使用佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
當(dāng)選用佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
含水流動相盡量在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。建議加入*，防止細(xì)菌生長。
流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。
使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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