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 分離度計算公式：

N：柱效(Efficiency)反映色譜柱性能，柱效越高，分離度越好。在其他條件恒定的情況下，塔板數增加一倍，分離度僅提高40%。操作中，可通過下面兩種方式增加塔板數進而提高分離度：其一，使用長柱或雙柱串聯(lián)，但也會使分離時間大大延長；其二，使用細粒徑填料的色譜柱，但這需要耐更高壓力的液相色譜系統(tǒng)。相比之下后者更為可取。
 

α：選擇性(selectivity)是指色譜柱-流動相體系分離兩個化合物的能力。選擇性主要與固定相、流動相組成以及柱溫等因素有關，與保留值也密切相關，其中固定相和流動相組成影響較大。以zui常見的反相模式為例，反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用對化合物進行保留的，不同化合物的分離是基于它們在鍵合相與流動相中分配系數的差異，如果兩種化合物的水溶性、在烷烴-水體系的分配系數等方面存在明顯差異，那么這些化合物通常是能夠利用反相柱達到分離；PH柱對具有苯環(huán)的化合物具有特殊保留。正相模式下，硅膠柱、胺基柱、氰基柱與帶有極性基團的化合物之間存在極性相互作用，對化合物的基團具有選擇性，常常用于結構類似物、異構體化合物的分離。流動相方面，降低流動相的洗脫強度通常可以增大分離度；而有機溶劑類型也會影響分離，比如反相條件下，乙腈和甲醇的選擇性就存在很大差異，這種差異需要在實踐中摸索，但無論如何，多種溶劑類型帶給我們更多的實現分離的可能。
 

k：隨著容量因子k的增大，分離度也隨之增加，這種影響在k值較低時非常明顯，當k值大于10時，k值增加對分離度的影響就不再顯著，這就告誡無原則地提高k值以增大分離度是沒有意義的。增加鍵合相密度能夠提高k值；另外改變鍵合基團類型也能改變k值，比如在反相色譜中，隨著鍵合相碳鏈長度的增加，k值逐漸增大。